尺寸排阻色譜柱是一種廣泛應(yīng)用于生物分析領(lǐng)域的工具，其工作原理主要基于分子大小差異進(jìn)行分離。利用柱內(nèi)固定相中孔隙與分子間的物理作用來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。具體來(lái)說(shuō)，聚合物分子在柱子中的孔道中被篩選，較大的分子無(wú)法通過(guò)尺寸較小的孔道，只有較小的分子才能通過(guò)這些孔道，從而實(shí)現(xiàn)不同分子尺寸的分離。其優(yōu)點(diǎn)在于其分離速度快、操作簡(jiǎn)單、分離效果好。此外，該技術(shù)不依賴于分子之間的親和性或化學(xué)性質(zhì)，因此適用于各種生物大分子，如蛋白質(zhì)、多肽和核酸等的分離。

　　尺寸排阻色譜柱在使用過(guò)程中可能會(huì)遇到以下一些常見(jiàn)問(wèn)題：

　　1、柱效與峰形問(wèn)題

　　柱效下降：可能是由于樣品與流動(dòng)相未過(guò)濾，雜質(zhì)堵塞柱子導(dǎo)致。若出現(xiàn)此現(xiàn)象，需用合適的溶劑沖洗柱子，如參考說(shuō)明書(shū)、操作手冊(cè)等文件進(jìn)行沖洗操作。另外，若使用的流動(dòng)相含有有機(jī)溶劑，也可能導(dǎo)致柱效下降。

　　峰形異常：包括峰型變寬、分岔、分離度下降等。這可能是進(jìn)樣量超過(guò)柱體積的5%，或樣品濃度過(guò)高、粘度大，使樣品無(wú)法以同一速度通過(guò)色譜柱，產(chǎn)生“指形效應(yīng)”。此時(shí)應(yīng)控制進(jìn)樣量和樣品濃度，保證樣品粘度與流動(dòng)相一致。

　　出現(xiàn)鬼峰：若不是溶劑與流動(dòng)相差異導(dǎo)致的基線波動(dòng)，需通過(guò)排除法，如進(jìn)空白溶劑、換柱子等，找到雜峰、鬼峰的來(lái)源并解決。

　　毛刺峰：通常是柱身中進(jìn)了空氣所致，可通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間低流速的流動(dòng)相沖洗去除氣泡。

　　2、保留時(shí)間漂移問(wèn)題

　　流動(dòng)相因素：若流速穩(wěn)定，可能是流動(dòng)相未完q混勻，導(dǎo)致洗脫強(qiáng)度不斷變化從而使保留時(shí)間漂移。需確保流動(dòng)相充分混合均勻后再進(jìn)行分析。

　　系統(tǒng)故障：若流速和壓力不穩(wěn)定，可能是儀器泵液系統(tǒng)產(chǎn)生漏液、故障等問(wèn)題，需要實(shí)際排查修復(fù)。

　　3、色譜柱堵塞與柱壓?jiǎn)栴}

　　柱頭篩板堵塞：如果柱頭篩板處堵塞導(dǎo)致柱壓接近柱壓上限，可以通過(guò)反向沖洗色譜柱來(lái)解決，但要注意將流出液體直接排至廢液桶防止二次污染。常規(guī)的由雜質(zhì)吸附填料引起的壓力升高，可通過(guò)正向沖洗掉雜質(zhì)來(lái)解決。

　　壓力超限：可能超過(guò)了色譜柱的最大耐壓，導(dǎo)致填料被壓實(shí)或損壞，影響分離效果和柱壽命。應(yīng)立即降低壓力，檢查并更換受損部件。

　　4、使用壽命問(wèn)題

　　雜質(zhì)影響：樣品和流動(dòng)相中的雜質(zhì)會(huì)堵塞柱子，縮短其壽命。因此樣品與流動(dòng)相進(jìn)樣前必須過(guò)濾，流動(dòng)相建議現(xiàn)配現(xiàn)用。

　　使用不當(dāng)：如在不適當(dāng)?shù)膒H值、緩沖液種類(lèi)或鹽濃度下操作，以及在極d溫度或壓力條件下使用等，都可能損害色譜柱。應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程使用和維護(hù)色譜柱。

　　5、溶劑相關(guān)問(wèn)題

　　溶劑不匹配：樣品溶劑與流動(dòng)相的不一致可能會(huì)導(dǎo)致不同程度的干擾，嚴(yán)重時(shí)會(huì)影響分離效果。一般要求溶劑與流動(dòng)相完q一致，或通過(guò)稀釋盡量保持接近。